化妝品中激素類成分的檢測(cè)方法

Determination of Hormone Components in Cosmetics1 范圍

本方法規(guī)定了采用高效液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定化妝品中的激素類成分粪滤，包括定性與定量皮卸。

本方法適用于膏霜乳液類赎躲、液態(tài)水基類脸夸、液態(tài)油基類套芦、凝膠類淘这、面膜類等化妝品中激素類成分的定性與定量穴张。

2 方法提要

樣品以乙腈為溶劑提取掉伏，采用高效液相色譜儀分離缝呕，質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間和特征離子對(duì)的相對(duì)豐度比定性斧散、定量離子對(duì)峰面積定量诚咪，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。

本方法對(duì)63種激素類成分的檢出限啸席、定量下限和取樣量為0.2 g時(shí)的檢出濃度搭肠、最低定量濃度見表1。

表1 63種激素類成分的檢出限币皂、定量下限掘防、檢出濃度和最低定量濃度3 試劑和材料

除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格堡脱，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水窿茧。

3.1 乙腈：色譜純。

3.2 正己烷：色譜純光蜀。

3.3 50%乙腈溶液：取乙腈算郭、水等體積混合，搖勻估态。

3.4 70%乙腈溶液：取乙腈循谨、水按體積比7:3混合，搖勻。

3.5流動(dòng)相的配制：

流動(dòng)相A：水

流動(dòng)相B：乙腈（3.1）

3.6標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液

分別稱取各激素標(biāo)準(zhǔn)品（表1）10 mg（精確到0.00001 g）置于50 mL容量瓶中倔撞，加乙腈（3.1）使溶解并定容至刻度讲仰。

4 儀器和設(shè)備

4.1液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。

4.2分析天平痪蝇。

4.3離心機(jī)鄙陡。

4.4超聲波清洗儀。

4.5渦旋混合儀躏啰。

5 分析步驟

5.1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

分別取各激素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.6）適量趁矾，用50%乙腈溶液（3.3）配制成濃度在定量下限附近的溶液。

注：實(shí)驗(yàn)室完成分析方法的優(yōu)化后给僵，如能夠保持儀器毫捣、色譜條件、質(zhì)譜測(cè)定參數(shù)等分析條件固定帝际，測(cè)定指標(biāo)重現(xiàn)性良好蔓同，可隨行質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品溶液代替63種激素混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液對(duì)分析條件的穩(wěn)定性、結(jié)果的重復(fù)性進(jìn)行控制蹲诀。如發(fā)生更改儀器斑粱、色譜條件、質(zhì)譜條件等情況粮锻，均需重新對(duì)各組分進(jìn)行定位粥蜘。

質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取曲安奈德、鹵美他松刃拼、哈西奈德渔缅、地塞米松、地塞米松醋酸酯额晶、氟氫縮松演湘、倍他米松戊酸酯、氯倍他索丙酸酯豌挫、環(huán)索奈德窃裙、雌二醇、己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)品各約10 mg（精確到0.00001 g）置于100 mL容量瓶中泄艘，用乙腈（3.1）溶解并定容至刻度宦噩，作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。置-20℃保存宗商。對(duì)于質(zhì)譜響應(yīng)較弱的成分衰拄，實(shí)驗(yàn)室可自行增加該成分作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以提高篩查準(zhǔn)確性裕照。

質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)混合溶液：分別量取質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液適量攒发，用50%乙腈溶液（3.3）配制成濃度在定量下限附近的溶液。5.2 樣品處理

5.2.1 膏霜乳液類、液態(tài)水基類惠猿、凝膠類羔砾、面膜類樣品

稱取樣品0.2 g（精確到0.001g），置于10 mL具塞比色管中偶妖，加入少量乙腈（3.1）姜凄，在渦旋混合儀上振蕩30s至試樣與提取溶劑混合均勻，然后加入乙腈至近刻度餐屎，超聲提取20 min檀葛，靜置至室溫玩祟，用乙腈（3.1）定容至刻度腹缩，搖勻，以4000 r/min離心10 min空扎，濾過（必要時(shí)取上清液適量用50%乙腈溶液（3.3）稀釋藏鹊，稀釋液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾），濾液作為待測(cè)溶液碎师。

5.2.2 液態(tài)油基類

稱取樣品0.2 g（精確至0.001g）仅莲，置于離心管中，加入2 mL正己烷（3.2）批贴，在渦旋混合儀上分散辉茴，然后加入70%乙腈（3.4）3 mL，渦旋振蕩2 min用噪，4000 r/min離心10 min女骗，吸取下層溶液至10 mL比色管中，上層正己烷層用70%乙腈（3.4）3 mL誓籽，自“渦旋振蕩2 min镣逃，…”起，重復(fù)上述步驟一次洪业，合并兩次溶液撼遵，加50%乙腈（3.3）定容至刻度，濾過（必要時(shí)用適量50%乙腈溶液（3.3）稀釋峭桅，稀釋液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾）甜杰，濾液作為待測(cè)溶液。

5.3儀器參考條件

5.3.1 參考色譜條件

色譜柱： C18柱 （150 ×2.0 mm吵护，2.2 μm）盒音，或等效色譜柱。

流動(dòng)相梯度洗脫程序：流速：0.3 mL/min何址；

柱溫：40 ℃里逆；

進(jìn)樣量：10 μL；

5.3.2 質(zhì)譜條件

離子源： 電噴霧離子源（ESI源）；

監(jiān)測(cè)模式： 正離子原押、負(fù)離子多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式胁镐，監(jiān)測(cè)離子對(duì)及相關(guān)參數(shù)設(shè)定見表2。

表2 63種激素類成分監(jiān)測(cè)離子對(duì)及相關(guān)參數(shù)設(shè)定表注：“*”為定量離子對(duì)

5.4 定性

取待測(cè)溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液在相同分析條件下測(cè)定诸衔，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對(duì)和定性離子對(duì)的色譜峰盯漂，被測(cè)成分的特征離子峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間一致，且選擇的定性離子的相對(duì)豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液的定性離子的相對(duì)豐度比的最大偏差不超過表3的規(guī)定笨农，則可以判定樣品中存在對(duì)應(yīng)的激素成分就缆。

注：如使用質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，應(yīng)滿足以下質(zhì)控條件：①各成分均檢出相應(yīng)的特征離子對(duì)谒亦，②特征離子對(duì)信噪比SN≥7资担，③保留時(shí)間相對(duì)偏差在±3%內(nèi)。當(dāng)樣品中檢出疑似陽性成分時(shí)炬费，應(yīng)隨行相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行確證踱孕。

表3 定性判定時(shí)離子相對(duì)豐度的最大允許偏差5.5 定量

5.5.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的制備

稱取待測(cè)激素標(biāo)準(zhǔn)品約10mg（精確到0.00001 g），置100 mL容量瓶中艾蜓，用乙腈（3.1）使溶解并定容至刻度将窗。

5.5.2系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

取與待測(cè)樣品基質(zhì)類型相同空白樣品6份于10 mL比色管中（0.2 g/份），分別加入標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液適量零反，按照“5.2樣品處理”的操作步驟處理泻畏，然后用50%乙腈溶液（3.3）配制系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。其中氟氫縮松迫讨、鹵美他松委丈、哈西奈德、雌二醇垦祭、雌三醇孔尸、雌酮濃度為6、10籍胯、20竟闪、30、40杖狼、60 ng/mL炼蛤，其余組分濃度為 2、4蝶涩、10理朋、20、40绿聘、60 ng/mL（標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度范圍可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整）嗽上。

5.5.3 樣品處理：同5.2

5.5.4 測(cè)定

取系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進(jìn)樣次舌，記錄定量離子對(duì)色譜峰面積并繪制峰面積（A）-濃度（C）標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)r≥0.99兽愤。取待測(cè)溶液進(jìn)樣彼念，測(cè)得定量離子色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)溶液中各成分的濃度浅萧，按“6”計(jì)算樣品中各成分的含量逐沙。

6分析結(jié)果的表述

6.1計(jì)算

式中： ω——樣品中激素類組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，g/g版挣；

ρ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)組分的質(zhì)量濃度蔓酣，g/mL；

V——樣品定容體積婆裹，mL载甸；

m——樣品取樣量，g纫脚；

D——稀釋倍數(shù)（如未稀釋則為1）钻琴。

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的15 %眶逐。

6.2 回收率和精密度

多家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證定量下限濃度回收率為72.7～122.1%况颈，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%（n=6），其他濃度回收率為80.7～119.6%洗吉，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于11%（n=6）勾奇。附錄A

（資料性附錄）

63種激素的中文名稱、英文名稱洋虫、CAS號(hào)及分子式（來源：國(guó)家藥監(jiān)局囱稽；編發(fā)：北京天健華成國(guó)際投資顧問有限公司化妝品注冊(cè)部）